Это исследование нужно разбирать пословесно!!! Читайте внимательно, каждое слово имеет ВЕС!
《Грибковое поражение пчелиных ульев в регионах, затронутых бразильским мешковидным расплодом.
Аннотации
Бразильский мешковидный расплод — это заболевание, поражающее пасеки африканизированных пчел в Бразилии, что делает их уязвимыми для высоких потерь. В данном исследовании изучалась патогенность африканизированных пчел энтомопатогенных грибов в эндемичном по этому заболеванию регионе Бразилии. Были исследованы степень грибкового загрязнения, наличие микотоксинов в элементах улья и уязвимость здоровых ульев в условиях, подверженных и не подверженных заболеванию. Из количества загрязняющих грибов были выделены виды, продуцирующие микотоксины и вызывающие гибель пчел. Анализ образцов пчелиной пыльцы и пчелиного хлеба не выявил присутствия токсичной пыльцы Stryphnodendron (Fabaceae), которая, как было установлено, является возбудителем смертности личинок на стадии предкуколки. Однако пчелиный хлеб показал наибольшую корреляцию между загрязнением субстрата и грибковым загрязнением.
Здоровье пчел; пчеловодство; плесень; микотоксины
Бразильские крики - это то, что пасеки африканских фермеров в Бразилии, торнандо-ос-сускетивы, пропадают на возвышенностях. Это исследование, посвященное изучению патогенеза энтомопатогенных грибов в рядах африканизированных колоний в эндемическом регионе энсакадского бразильского континента. В случае большого грибкового загрязнения присутствие микотоксинов в элементах колмеи и уязвимость колмий в окружающей среде и не подвергаются исследованиям. Часть грибкового загрязнения, особенно производители микотоксинов и патогенов, провоцируют смертельный исход животных, изолированных. Анализ почвы и листьев не демонстрирует наличие токсичного полиса Стрифнодендрона (Fabaceae), который является причиной гибели личинок в фазе предкуколки. Нет, это не означает, что поверхность может быть коррелирована с грибковым загрязнением.
санидаде апикола; пчеловодство; грибы; микотоксины
ВВЕДЕНИЕ
Медоносные пчелы на протяжении всей своей жизни уязвимы для постоянного воздействия различных сапрофитных микроорганизмов, патогенов и паразитов. В ответ на инфекции и поражения пчелы выработали несколько механизмов иммунитета, чтобы предотвратить проникновение захватчиков в гемоцеле. (Данн, 1986) Кроме того, нездоровые экосистемы могут способствовать развитию микроорганизмов и паразитов, а также их распространению по всему миру.
Бразильский мешковидный расплод (БМР) представляет собой серьезную угрозу для здоровья медоносных пчел в Бразилии, встречаясь в основном на юго-востоке страны и
вызывая огромные потери в популяции пчел (Карвалью и Мессаже, 2004).Это заболевание характеризуется тем, что расплод не окукливается и впоследствии погибает (Кастаньино и др. , 2011).Быстрое появление симптомов затрудняет их выявление, высокая смертность личинок приводит к заражению оппортунистическими микробами, а также к бегству роев из улья (Message et al. 1995)Симптомы BSB схожи с симптомами вируса мешковидного гниения (SBV), и до 2012 года предыдущие исследования многочисленных образцов личинок с симптомами, похожими на мешковидное гниение, собранных в различных частях Бразилии, не выявили признаков этого вируса на основе морфологии вирусных частиц и серологических методов. Недавно SBV был впервые обнаружен в Бразилии, за исключением регионов, где встречается BSB (Фрайберг и др. , 2012).
Исследования на бразильских пасеках показывают, что причиной бактериального гниения пчел является потребление ими дубильных веществ, токсичных веществ, попадающих в улей с пыльцой цветков стрипнодендрона (семейство бобовых) (Синтра, 2002)
Однако исследования показали наличие случаев заболевания пчелиным жуком-короедом в регионах, где употребление токсичной пыльцы в улье не было подтверждено (Пачеко, 2009), что позволяет предположить, что это заболевание может иметь другого возбудителя.
В жарком климате грибы могут поражать личинки пчел, несмотря на отсутствие видимых симптомов. Грибы являются переносчиками болезней, которые обычно связаны с ульями, и при определенных абиотических условиях некоторые виды грибов продуцируют микотоксины. Aspergillus flavus , агрегаты Aspergillus niger и Aspergillus fumigatus — это энтомопатогенные виды пчел, которые могут вызывать снижение иммунитета у насекомых, делая их восприимчивыми к заражению другими переносчиками болезней и возбудителями заболеваний (Глинский и Бучек, 2003)
Некоторые факторы могут предрасполагать к грибковым инфекциям, такие как стресс, загрязнение окружающей среды и отравление пестицидами (Саутвик, 1994; Глинский и Ярош, 2001).
Учитывая подозрение на грибковое заражение ульев африканизированных пчел бактерией BSB, целью данного исследования было изучение степени грибкового заражения элементов ульев в регионах с наличием и отсутствием BSB, а также установление корреляции между грибами и уязвимостью ульев к этому заболеванию.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Этот эксперимент проводился в двух разных регионах, обозначенных как А и В. Исследуемые регионы относятся к разным округам и расположены в южной части штата Рио-де-Жанейро. Они имеют горные массивы с хорошо фрагментированной растительностью атлантического леса, климат и видовой состав флоры схожи. Большинство сельских общин — это фермерские семьи, основными источниками средств к существованию являются животноводство и туризм, в то время как пчеловодство не является распространенным занятием, несмотря на благоприятные условия для разведения медоносных пчел. Среднегодовой урожай меда в этих регионах составляет около 20 кг с улья.
Регион А свободен от BSB (короеда-нематода), а регион В является эндемичным по этому заболеванию. Из региона В для проведения исследования была выбрана одна пасека, насчитывающая 10 ульев, и, согласно ее данным, в августе и сентябре (сезон нектара) наблюдались значительные потери ульев, пораженных BSB.
Из региона А была выбрана другая пасека, из 18 ульев которой случайным образом были отобраны 5 для перемещения в регион В. Расстояние между двумя регионами составляет 60 км. В обоих регионах до распространения BSB наблюдалось обильное разнообразие растительности, благоприятной для производства меда из цветков вернонии и эвкалипта .
Образцы, собранные из ульев в обоих регионах, включали соты с гнездом для потомства, корм (мед и пчелиный хлеб) и взрослых пчел. Затем ульи были перенесены из региона А в регион В; образцы собирались еженедельно до появления первых типичных симптомов заражения пчелиным жуком-короедом. Из собранных образцов отбирались кусочки сотов диаметром приблизительно 5 см, содержащие пчелиный хлеб, мед и личинки последней стадии развития (предкуколочная стадия); также из сотов отбирались десять взрослых пчел. Образцы помещались в стерильные колбы и немедленно убирались в холодильник. Все процедуры сбора и анализа образцов проводились в соответствии с принципами надлежащей гигиенической практики (Сенай, 2009).
В лаборатории охлажденные образцы подвергали мелиссопалинологическому анализу без ацетолиза (Луво и др. , 1970; Барт и Луз, 1998; Луз и др. , 2007) и измерения активности воды (Aw). Подсчет общего количества микробиоты и ее выделение проводились с использованием чашек Петри методом серийных разведений (Питт и Хокинг, 2009).
Инокуляция проводилась в трех повторениях, а в качестве культуральных сред использовались агар с дихлораном, бенгальским розовым и хлорамфениколом (DRBC), агар с дихлораном и глицерином при 18% содержании хлорамфеникола (DG18) и агар Нэша-Снайдера (NSA). (Нельсон и др. , 1983)
Идентификация основывалась на роде и виде всех колоний в соответствии с...Самсон и др. (2000), Клич (2002), Питт (1988) и Нельсон и др. (1983).
Для характеристики токсигенного профиля были проанализированы штаммы секции Flavi и Nigri рода Aspergillus в соответствии с...Гейзен (1996) и Брагулат и др. (2001), соответственно.
Статистическое моделирование проводилось с использованием экспериментального плана и латинских квадратов, содержащих данные по трем вариантам обработки для различных культуральных сред, используемых для идентификации грибов (DRBC, DG18, NSA), двум блокам для периода (до пересадки и после пересадки) и четырем блокам для анализируемых образцов (мед, пчелиный хлеб, личинки и взрослые пчелы). Результаты анализа всех этих переменных были представлены в виде колониеобразующих единиц (КОЕ·г⁻¹ ) . Для модели, определенной по следующей формуле, был применен дисперсионный анализ:
Y ij (k) = µ + π i + β j + τ (k) + ε ij
i = 1, 2; j = 1, 2, 3, 4; k = 1, 2, 3
где Y ij (k) — зависимая переменная (подсчет грибов), объясняемая общим средним значением μ , эффектом i -го блока π i (период), результатами, представленными в j -м блоке β j (четыре субстрата), и основанная на k -м варианте обработки τ (k) (культуральные среды). ε ij представляет собой остаток. Для оценки значимых различий в средних значениях анализируемых вариантов обработки использовался тест Тьюки на уровне значимости 5% (Хинкельманн и Кемпторн, 2008 г.).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Через 15 дней после прибытия ульев из региона А в регион В грибковая инфекция усилилась в большинстве ульев (регион А). Главным симптомом является неудача окукливания и быстрое распространение инфекции на пасеке региона В. В этом регионе уже был диагностирован короед.
В ходе данного исследования анализ образцов пчелиной пыльцы и пчелиного хлеба не выявил наличия токсичной пыльцы стрипнодендрона (Fabaceae).
Таблица 1 ), который был указан как возбудитель смертности личинок на стадии до куколки. Более того, результаты исследований, а также результаты анализа образцов из других округов штата Рио-де-Жанейро, где распространен BSB, также не показали наличия этой токсичной пыльцы. Тем не менее, в других штатах юго-восточного и центрального регионов Бразилии наличие танина в пыльце Stryphnodendron считается возбудителем BSB.
Миниатюра
Таблица 1.
Типы пыльцы и примесей в образцах пчелиного хлеба (n = 18), собранных из колоний африканизированных пчел в регионах с наличием и отсутствием пчелиного хлеба в штате Рио-де-Жанейро, Бразилия.
Что касается грибкового заражения, то анализ уровня загрязнения ульев до и после пересадки показал значительное увеличение уровня заражения ульев во всех культуральных средах.
Таблица 2 ). Масштаб грибкового загрязнения был очевиден (Таблица 3 ) вскоре после переноса в регион B. Эти результаты указывают на то, что инфекция имеет своим источником определенные нездоровые условия, такие как место проведения испытаний (регион

, которое должно быть подвержено воздействию грибковых агентов загрязнения и имеет условия, способствующие появлению этих микробных агентов.
Миниатюра
Таблица 2.
Средняя грибковая нагрузка (КОЕ·г⁻¹) и коэффициент вариации (%) субстратов медоносных пчел до пересадки (область А) и после пересадки (область В).
Миниатюра
Таблица 3.
Увеличение грибкового загрязнения субстратов медоносных пчел после переноса улья из региона без BSB (A) в регион с BSB (

.
Среди трех питательных сред наибольшую эффективность показала среда DRBC, что и ожидалось, учитывая, что это универсальная питательная среда, позволяющая выращивать грибы в идеальных условиях. Кроме того, дисперсионный анализ показывает различия в загрязнении в зависимости от природы субстрата (p-значение < 0,01).
Таблица 4 ).
Пчелиный хлеб показал самую высокую грибковую нагрузку. Хотя другие субстраты также показали высокий уровень загрязнения, различия не являются статистически значимыми ( p-значение > 0,05).
Рисунок 1 ).
Признаки заражения пчелиного хлеба подтверждают биологически значимую роль этого субстрата.
Миниатюра
Таблица 4.
Результаты дисперсионного анализа и критерия согласия Жарка-Бера.
Рисунок 1.
Разница средних значений анализируемых субстратов, а именно: меда, пчелиного хлеба, личинок и взрослых пчел, с использованием критерия Тьюки.
При сужении результатов анализа до парных субстратов можно убедиться, что пчелиный хлеб и взрослые пчелы являются наиболее зараженными элементами улья.
Рисунок 1 ). Это может быть связано с тем, что пыльца — это субстрат, богатый жирными кислотами и легко загрязняемый (Хани и др. , 2012).
Таким образом, это способствует прикреплению спор грибов к волоскам на теле взрослых пчел-фуражиров. Однако мед был наименее подвержен воздействию окружающей среды субстратом в улье, поскольку нектар из цветов наименее подвержен загрязнению, и после сбора пчелой он претерпевает значительную трансформацию и концентрируется.
Исследования показали, что рост грибов в улье, особенно на пчелином хлебе, происходит при сильной нехватке воды. В этом субстрате показатель Aw был близок к 0,64. Более того, исследования показали, что нитевидные грибы прорастают в различных субстратах, где показатель Aw варьируется от 0,65 до 0,90. (Питт и Хокинг, 2009), что выходит за рамки производства токсичных метаболитов (микотоксинов) (Роза и др. , 2006). Большинство микроорганизмов, ответственных за разложение пищевых продуктов, не развиваются при низких значениях Aw, что способствует и стимулирует присутствие ксерофильных видов грибов, в отличие от загрязнения пчелиного хлеба, показанного в данном исследовании.
Возможно, штаммы грибков использовали мед в качестве идеальной среды для получения необходимой влажности, поскольку внутри улья мед является субстратом с уровнем влажности более 25% на стадии зрелости. Кроме того, поскольку мед был доступен в изобилии (более 15 кг на улей), он мог обеспечить достаточно энергии для роста грибков. Эта грибковая инфекция считается головокружительной, с самым длительным периодом инфицирования (Таблица 2 ).
В микробиоте ульев региона А был выделен Cladosporium spp., присутствовавший во всех образцах. Aspergillus был вторым по частоте выделения родом; все идентифицированные виды являлись потенциальными продуцентами микотоксинов: Penicillium citrinum — цитринин; Aspergillus flavus — афлатоксины; и агрегаты Aspergillus niger — охратоксин А. Cladosporium был наиболее часто встречающимся родом (75%) даже в образцах пчелиного хлеба из региона В. Однако наблюдалась высокая колонизация разнообразной грибной микробиотой с присутствием трех основных родов, продуцирующих микотоксины, а именно Aspergillus , Penicillium и Fusarium . Таким образом, наиболее часто идентифицируемыми видами были грибы, потенциально продуцирующие микотоксины.
Таблица 5 ).
Миниатюра
Таблица 5.
Грибковая нагрузка (КОЕ·г⁻¹)а в образцах пчелиного хлеба (среда для культивирования DRBC), выделенная микробиота, а также относительная плотность и частота видов грибов из ульев, в которых наблюдались грибковые инфекции.
Быстрое начало заражения (2 недели) — достаточное время для появления и распространения оппортунистических грибов, таких как агрегаты Aspergillus niger и Aspergillus flavus, которые являются патогенами пчел (Глинский и Бучек, 2003).
Присутствие различных видов грибов может создавать конкуренцию между грибами и организмом, что приводит к развитию патогенности в виде микоза в пчелином улье (Глинский и Ярош, 2000).
Было подтверждено выделение видов, продуцирующих микотоксины, такие как афлатоксины и охратоксин А, а также выделены штаммы Aspergillus flavus , продуцирующие афлатоксин B1.
Согласно (Хиллдруп и Ллевеллин 1979) Apis mellifera наиболее чувствительна к афлатоксину B1 ; однако для определения ее восприимчивости к другим микотоксинам необходимы дальнейшие исследования. Присутствие афлатоксинов в рационе пчел может вызывать высокую смертность даже при концентрациях ниже 5 мкг/г . Афлатоксины действуют непосредственно на центральную нервную систему, влияют на эндокринную систему и ослабляют внутреннюю защитную систему пчел, снижая при этом устойчивость к микотической инфекции (Глинский и Бучек, 2003) (Хиллдруп и др.1977). Было подтверждено наличие афлатоксинов в низких концентрациях в образцах пыльцы, медовых сот (гнезд), личинок и взрослых пчел, за исключением необработанного меда.
Было подтверждено выделение видов, продуцирующих микотоксины, такие как афлатоксины и охратоксин А, а также выделены штаммы Aspergillus flavus , продуцирующие афлатоксин B1 . Согласно (Хиллдруп и Ллевеллин 1979) Apis mellifera наиболее чувствительна к афлатоксину B1; однако для определения ее восприимчивости к другим микотоксинам необходимы дальнейшие исследования. Присутствие афлатоксинов в рационе пчел может вызывать высокую смертность даже при концентрациях ниже 5 мкг/г . Афлатоксины действуют непосредственно на центральную нервную систему, влияют на эндокринную систему и ослабляют внутреннюю защитную систему пчел, снижая при этом устойчивость к микотической инфекции (Глинский и Бучек, 2003) (Хиллдруп и др. 1977). Было подтверждено наличие афлатоксинов в низких концентрациях в образцах пыльцы, медовых сот (гнезд), личинок и взрослых пчел, за исключением необработанного меда.
В ульях медоносных пчел существуют важные защитные механизмы, такие как чистка шерсти (Траниелло и др. , 2001) и биохимические барьеры (Глинский и Ярош, 2000), которые гарантируют предотвращение микотических инфекций. С точки зрения здоровья, сила и организация колонии являются важными факторами, способствующими поддержанию устойчивости улья к патогенам. Однако это не оценивалось в данном исследовании. Имеющиеся данные показывают, что патогены легко селились в заселенных ульях, и в периоды обилия пищи эти патогены выделяли микотоксины и демонстрировали колонизацию таким образом, что она была незаметной для пчел-солдат, вызывая высокую смертность личинок пчел (Рисунок 2 ). Следовательно, высокая степень заражения грибами-сапрофитами может быть объяснена количеством выделенных видов.
Инвазия была быстрой, а заражение – очень интенсивным.Таблица 2 ) таким образом, что это препятствовало всем санитарным действиям пчел, таким как удаление мертвых пчел, оставляя пчелиному улью единственный выход — покинуть его. Возможно, что
пчелы-фуражиры являются переносчиками патогена(ов), и что сбор пыльцы и последующее превращение ее в пчелиный хлеб способствует микотической колонизации улья, тем самым непосредственно влияя на личинки.Рисунок 2
(A) Улей, пораженный бактериальным гнильцом; (B и C) Непосредственные симптомы после оставления мертвых птенцов и проникновения условно-патогенных организмов в мед.
Исследование показало, что пчелиный хлеб в качестве субстрата является оптимальным средством заражения ульев, содержащих микробиоту, богатую грибами, продуцирующими микотоксины. Из ульев были выделены патогенные виды, которые снижают иммунитет пчел, делая их восприимчивыми к заражению другими переносчиками.
Эта беззащитная ситуация усугубляется в присутствии микотоксинов, которые являются иммунодепрессантами и способствуют гибели пчел.》《Грибковое заражение пчелиных ульев в регионах, пострадавших от бразильского расплода в мешках
Fungi infection in honeybee hives in regions affected by Brazilian sac brood
Kelly Moura Keller
Michele Valadares Deveza
Adriano Koshiyama》
Перечитайте ещё раз более внимательно!